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食品安全與動物疫病熒光定量快速檢測技術(shù)領(lǐng)跑者!
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怎樣檢測黃曲霉素

怎樣檢測黃曲霉素

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  黃曲霉素主要是一類真菌毒素,主要是由黃曲霉、寄生曲霉和集峰曲霉產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物。黃曲霉毒素(AFT)是迄今發(fā)現(xiàn)的霉菌毒素中毒性最大、對人類健康危害極為突出的一類霉菌毒素,有AFB1、AFB2、AFG1、AFG2等多種形式,它們存在于土壤、動植物、各種堅(jiān)果中,特別是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麥等糧油產(chǎn)品,對人和動物有強(qiáng)烈的毒性。

  黃曲霉素檢測最初以薄層層析法為主,發(fā)展到高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法等多種方法普遍應(yīng)用,其進(jìn)展與新的化學(xué)檢測手段和新儀器的出現(xiàn)密不可分。這些新方法、新手段的快速應(yīng)用,為黃曲霉毒素的檢測提供了更廣泛的選擇余地,適應(yīng)了不同的檢測目的和要求。

  通過這些方法都可以明確是否有黃曲霉毒素,黃曲霉素的高毒性對人類的健康危害極大,所以必須嚴(yán)格控制農(nóng)產(chǎn)品中黃曲霉素的含量,保證食品的安全。

  薄層分析法(TLC)

  TLC法是檢測黃曲霉素最為經(jīng)典的方法,也是以前最為常用的方法,至今仍為一些檢測機(jī)構(gòu)所用,也是一種國標(biāo)方法。其原理是針對不同的試樣,用適宜的萃取溶劑將黃曲霉素從試樣中萃取出來,經(jīng)柱層析凈化后,再在薄板上展開后分離。利用黃曲霉素的熒光特性,根據(jù)熒光斑點(diǎn)的強(qiáng)弱與標(biāo)準(zhǔn)比較確定其含量,對于一些組分很復(fù)雜的試樣要雙向展開,才能獲得較高的靈敏度。

  TLC法設(shè)備簡單,檢測費(fèi)用低,但操作繁瑣、費(fèi)時,萃取和凈化效果不理想,靈敏度差,對操作人員的身體健康存在較大程度的危害。

薄層分析法(TLC)

  液相色譜法(HPLC)

  液相色譜法是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的檢測黃曲霉毒素的方法,主要是用熒光檢測器檢測,這一檢測方法將化學(xué)分析與領(lǐng)先的計(jì)算機(jī)技術(shù)相結(jié)合,使自動化程度得到極大提高,在實(shí)驗(yàn)空間、人力和儀器都保持不變的情況下,能檢測更多的樣品。其原理是根據(jù)衍生后的黃曲霉毒素在固定相和流動相之間的分配量不同,從而達(dá)到分離的目的,分離后的黃曲霉毒素能發(fā)射特征性熒光,被熒光檢測器捕獲后得到檢測。該方法既可采用正相色譜也可采用反相色譜。正相色譜中固定相一般使用硅膠柱,流動相使用以50%水飽和的三氯甲烷:環(huán)己烷:乙腈:乙醇。反相色譜固定相為C18,流動相為乙酸:乙腈:異丙醇:水(1∶5∶5∶39)。

  該法能準(zhǔn)確地分離不同種類的黃曲霉素(例如:AFB1、AFB2、AFG1和AFM1等),檢測速度快且定性與定量準(zhǔn)確,檢測限低,可作為仲裁法使用,但儀器設(shè)備價格昂貴,前處理方法相對繁瑣,若用到免疫親和柱則會使試樣檢測費(fèi)用增加,對操作人員的身體健康仍存在一定的危害。

液相色譜法

  酶聯(lián)免疫法(ELISA)

  ELISA法也是近年來研究開發(fā)出來的一種較為新穎的方法。ELISA 法測定黃曲霉毒素時主要采用間接競爭酶聯(lián)免疫吸附法,原理是將黃曲霉毒素的特異性抗體包被于聚苯乙烯微量反應(yīng)板的孔穴中,再加入待測樣品及酶標(biāo)已知抗原,兩者與特異性抗體進(jìn)行免疫競爭反應(yīng),然后加入酶底物顯色,利用酶標(biāo)儀根據(jù)顯色反應(yīng)顏色的深淺進(jìn)行定量。

  該方法測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠,操作簡便,所涉及儀器及試劑比較少,回收率高,實(shí)驗(yàn)步驟也比較簡單,是目前國內(nèi)外較為先進(jìn)的黃曲霉毒素檢測方法。但抗體壽命短且需要低溫保存,測定時假陽性率比較高,適合于大量樣品的篩查。

酶聯(lián)免疫法

  金標(biāo)試紙法

  金標(biāo)試紙法,實(shí)際就是一種固相免疫分析法。其原理是利用抗體與抗原的特異性結(jié)合反應(yīng),可一步檢測黃曲霉素。

  該法可在5~10 min內(nèi)完成對試樣中黃曲霉素的定性測定,具有簡單、快速的特點(diǎn),且無須其他儀器設(shè)備的配合,既可在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行檢測,也可在現(xiàn)場進(jìn)行實(shí)地測定,但是其檢測的準(zhǔn)確度、精度有待進(jìn)一步的研究。

金標(biāo)法

  熒光定量檢測法

  南京微測熒光定量FPOCT快速檢測技術(shù)平臺,具有靈敏度高、定量范圍寬、準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性強(qiáng)、操作快速簡便等優(yōu)點(diǎn),正逐步替代膠體金試紙條和酶免試劑盒等傳統(tǒng)快速檢測產(chǎn)品,引領(lǐng)全球食品安全和動物疾病快速檢測從粗略定性到準(zhǔn)確定量的升級換代。

  由于熒光定量檢測技術(shù)具有檢測精度高、重復(fù)性好、操作簡單、方便攜帶和適用于現(xiàn)場檢測等優(yōu)點(diǎn),因此各糧油食品飼料加工企業(yè)都開始逐步使用熒光定量黃曲霉毒素快速檢測儀設(shè)備用于黃曲霉檢測。

熒光定量免疫層析技術(shù)

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